阪崎腸桿菌（Enterobactersakazaii）是奶粉（乳）制品中新發(fā)現(xiàn)的一種致病菌。由其引發(fā)的嬰兒、早產(chǎn)兒腦膜炎、敗血癥及壞死性結腸炎散發(fā)和暴發(fā)的病例已在全球相繼出現(xiàn)。本公司自主研發(fā)的阪崎腸桿菌核酸檢測試劑盒采用實時熒光PCR技術，針對阪崎腸桿菌基因的核酸序列設計特異性引物和探針，通過實時熒光 PCR反應對奶粉（乳）制品中的阪崎腸桿菌進行定性檢測，靈敏度高，特異性強，能快速檢測出奶粉（乳）制品中的阪崎腸桿菌。

試劑盒組成

檢測步驟

1.樣本處理取100g(ml)樣品，加入900ml 的無菌蒸餾水，震蕩溶解，與 37度培養(yǎng)15h 左右。移取 1ml轉入 10ml 改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯中， 37度震蕩培養(yǎng)約5h 。

2.樣本DNA提取取1.5ml增菌液，采用商品化的細菌DNA 提取試劑盒，按照試劑盒說明提取樣本 DNA。對提取的DNA 進行濃度測定， DNA溶液的OD260/280 比值在 1.7-2.0 為最佳。

3.試劑準備冰上解凍反應試劑，反應液保持避光，解凍后將反應液混勻并簡短離心，按每管20ul的量分裝至PCR 管中。

4.PCR加樣每管中加入DNA樣本5ul ，蓋好管蓋，簡短離心，同時做陽性對照，陰性對照和空白對照（以水代替樣本 DNA）。

5.PCR擴增將加好的樣品放置在PCR 儀中，熒光通道選擇FAM ， PCR 反應參數(shù)見表，使用不同的PCR 儀，反應參數(shù)可適當調整。

6.結果分析

基線和閾值的設置：基線范圍設置在3-15個循環(huán)，閾值設置在基線剛好超過陰性對照擴增曲線的最高點。

質量控制：陽性對照CT≤30，有S 型擴增曲線；陰性對照無CT值，擴增曲線為直線；空白對照無CT值，擴增曲線為直線。若出現(xiàn)任一結果不正常，需重做實驗。

結果判定

1.檢測樣品無CT值，曲線為直線或無S 型擴增曲線，判定結果為陰性。

2.檢測樣品CT≤35，出現(xiàn)S型擴增曲線，判定結果為陽性。

3.檢測樣品35﹤CT ﹤40并有S型擴增曲線，需適當增加DNA模板量后重新做實時熒光PCR檢測，再次檢測結果CT值仍處于35和40之間，并且有S型擴增曲線，判定結果為陽性，否則判定為陰性。檢出限

4cfu/ml(g)

包裝規(guī)格

 40次/盒

注意事項

1.初次使用前請仔細閱讀說明書，并嚴格按照說明書進行操作。

2.實驗操作要嚴格分區(qū)，防止污染。

3.反應液反復凍融會降低靈敏度，建議分管保存。

4.本試劑盒僅供定性篩查用。

5.篩選陽性的樣本需按國標法進行確證。

儲藏條件與有效期

本試劑盒保存于-20℃，有效期 12個月。